La phénytoïne et le valproate augmentent la teneur en phénobarbital dans le sérum sanguin.
L'effet du phénobarbital diminue avec l'administration simultanée de réserpine, augmente lorsqu'il est combiné avec l'amitriptyline, le nialamide, le diazépam, le chlordiaazepoxide.
Réduit l'efficacité des contraceptifs oraux et des salicylates.
Réduit le sang dans le sang des anticoagulants indirects, des glucocorticostéroïdes, de la griséofulvine, de la doxycycline, des œstrogènes et d'autres médicaments métabolisés dans le foie le long de la voie d'oxydation (accélère leur métabolisme).
Renforce l'effet de l'alcool, des neuroleptiques, des analgésiques narcotiques, des myorelaxants, des sédatifs et des hypnotiques.
L'acétazolamide, urine alcalinisante, réduit la réabsorption du phénobarbital dans les reins et affaiblit son effet.
Réduit l'activité antibactérienne des antibiotiques et des sulfamides, action antifongique de la griséofulvine.